Иммуногистохимия (ИГХ) – метод, основанный на изучении специально подготовленных и окрашенных срезов тканей. Заглянув в микроскоп, специалист может с высокой точностью выявить в анализируемом образце белки-маркеры той или иной патологии. По словам экспертов, диагностические возможности иммуногистохимии сегодня почти безграничны.
|
|
– Многие думают, что патологоанатомы работают только с аутопсийным – посмертным материалом. Как раз таки нет. У нас в год проходит более 20 тысяч иммуноцитогистохимических исследований, и две трети из них – прижизненные, – говорит Руслан Насыров, проректор по научной работе, заведующий кафедрой патологической анатомии с курсом судебной медицины Педиатрического университета. |
На основе ИГХ-анализа врач может подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований. Впервые метод применил в 1941 году иммунолог Альберт Кунс, но широкое распространение данное направление получило только в 90-е годы XX века. В Педиатрическом университете специализированная лаборатория работает с 2007 года. Оснащена она, без преувеличения, по последнему слову техники, но процесс становления и развития продолжается: появляются новые антитела, новые реагенты, новые методики.
|
|
– С приходом иммуногистохимии патологическая анатомия переживает эпоху ренессанса, рассвета. Смотря в обычный световой микроскоп, мы создаём молекулярный образ патологического процесса, – объясняет профессор Насыров, и продолжает: «Изюминка, красота иммуногистохими в том, что это не просто методология – это искусство». |
Как это работает?
В основе метода механизм взаимодействия антитела с антигеном. Антитела – это особые молекулы того или иного белка, которые иммунная система использует, чтобы обнаруживать и уничтожать чужеродные вещества – антигены. Каждое антитело связывается строго с определенным антигеном – отсюда высокая точность исследования.
|
|
– Выявляются все те маркеры, которые известны в иммунологии: различные популяции лимфоцитов, различные типы тканей. Это факторы роста, рецепторы не только к инфекционным агентам, но даже к лекарственным препаратам, – утверждает заведующий кафедрой патологической анатомии. |
Особое значение методика сегодня приобрела в онкологии. Иммуногистохимия позволяет определить тип опухоли, выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию заболевания, какой очаг был первичным и дал метастазы. ИГХ-анализ – самый эффективный способ подобрать таргетный препарат и спрогнозировать результаты лечения. Иммуногистохимия даёт ответ на вопрос о том, как раковые клетки реагируют на химиотерапию, лучевую терапию…
Также этот метод нашел применение в диагностике системных заболеваний соединительной ткани и почек, целиакии, болезни Гиршпрунга… ИГХ-исследование позволяет выявлять бактерии и вирусы в изучаемых тканях, будь то Covid-19, вирус Эпштейна-Барра, папилломавирус, хеликобактер пилори или микобактерии…Количество маркеров, молекул-мишеней измеряется сотнями – главное, чтобы исследователь заранее имел представление, что он ищет и использовал соответствующие антитела.
|
|
- Объективная диагностика – это значит и соответствующее лечение, благоприятный исход и прогноз заболевания, который потом определяет качество жизни человека, - уверен Руслан Насыров. |
Добавим, что лаборатория Педиатрического университета выполняет исследования не только в интересах клиники вуза, более половины образцов приходит из других медицинских учреждений города и области и даже из других регионов.
Как проводят исследование?
Для начала необходимо получить материал для анализа. Это может быть кусочек ткани после биопсии, фрагмент органа или даже целый орган, удаленный во время операции.
Образец фиксируют с помощью 10% формалина. Далее следуют так называемые проводка и заливка в парафин – эти процессы в лаборатории СПбГПМУ автоматизированы.
Затем с помощью микротома – нарезают парафиновый блок на срезы, толщиной – от 3 до 5 микрон – тоньше человеческого волоса. Далее лаборант отбирает срезы и помещает на предметные стёкла, покрытые адгезивом (клеем).
А потом парафин, которым долго и тщательно «пропитывали» образцы нужно полностью удалить, – иначе антитела не прореагируют с антигеном. Эта процедура называется депарафинизацией.
Наконец, после предварительной обработки можно приступить собственно к иммуногистохимии. Она бывает прямой и непрямой. В первом случае используют один вид антител, которые должны вступить в связь с определенной молекулой-мишенью. Если искомый антиген присутствует в ткани, ткань окрашивается.
Более отчётливый результат позволяет получить непрямая иммуногистохимия. При этом используют два антитела – одно соединяется с антигеном, второе – с полученным комплексом антиген-антитело. Обработанную ткань рассматривают под микроскопом, чтобы проверить, окрасилась ли она. Для окраски тоже есть специальное оборудование, но нередко предпочтительнее оказывается ручной труд.
|
|
– Методика достаточно тонкая. На результат может повлиять качество воды и даже движение луны, настроение исследователя, – шутит проректор по научной работе. |
По словам Руслана Насырова, очень важно исключить субъективность оценки, поэтому в течение рабочего дня всегда в лаборатории всегда отводят время для профессиональной дискуссии. Впрочем, нельзя отрицать, что современные исследования – как иммуногистохимические, так и гистологические – становятся всё более точными.
|
|
– Мы всегда можем показать врачу-клиницисту на стекле то, что мы обнаружили. Когда патологоанатом просто говорит и не показывает – это сомнительно. Он должен всегда продемонстрировать это на снимке, в микроскопе, – отмечает заведующий кафедрой. |
И вообще, патологическая анатомия, которая у обывателя может вызывать мрачные ассоциации, при ближайшем рассмотрении оказывается наукой про жизнь и для жизни.
|
|
– Я иногда на лекциях говорю, что патологическая анатомия – это царица наук. Она связана со всеми клиническими специальностями – педиатрией, терапией, неврологией, неонатологией, хирургией... Врачу-патологоанатому необходимо обладать знаниям всех специальностей. При разборе того или иного случая, биопсийного, операционного или аутопсийного материала, он должен обосновывать свой взгляд, свое видение того процесса, который он выставляет в диагнозе, – уверен Руслан Насыров. |